多肽固相合成反應原理
要成功合成(多肽固相合成)具有特定的氨基酸順序的多肽,需要對暫不參與形成酰胺鍵的氨基和羧基加以保護,同時對氨基酸側鏈上的活性基因也要保護,反應完成后再將保護基因除去。
固相中(多肽固相合成)的接肽反應原理與液相中的基本一致,將兩個相應的氨基被保護的及羧基被保護的氨基酸放在溶液內并不形成肽鍵,要形成酰胺鍵,經常用的手段是將羧基活化,變成混合酸酐、活潑酯、酰氯或用強的失去劑(如碳二亞氨)形成對稱酸酐等方法來形成酰胺鍵。其中選用DCC、HOBT或HOBT/DCC的對稱酸酐法、活化酯法接肽應用廣。
裂解及合成肽鏈的純化 BOC法用TFA+HF裂解和脫側鏈保護基,FMOC法直接用TFA,有時根據條件不同,其它堿、光解、氟離子和氫解等脫保護方法也被采用。合成肽鏈進一步的精制、分離與純化通常采用高效液相色譜、親和層析、毛細管電泳等。
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