訂書肽（Stapledpeptides）合成策略是近年來獲得廣泛關(guān)注的一類多肽修飾新技術(shù)，該策略通過在多肽骨架上引入不同的官能團(tuán)，來達(dá)到獲得穩(wěn)定性強(qiáng)、細(xì)胞通透性好的多肽模擬物。該策略已在一些胞內(nèi)PPIs的調(diào)控方面都展示了很好的潛力。其中，Verdine等人發(fā)展了在多肽序列中i,i+3或i,i+4或i,i+7位置引入不同長度側(cè)鏈帶有α-甲基的非天然氨基酸通過烯烴復(fù)分解反應(yīng)（RCM反應(yīng)）來合成訂書肽的方法。這種新的含有α-甲基非天然氨基酸的引入的訂書肽策略能夠有效地提高多肽的螺旋性、穩(wěn)定性和細(xì)胞通透性，從而成功實現(xiàn)多肽體外及體內(nèi)對胞內(nèi)靶標(biāo)的調(diào)控。本公司擁有多種不同類型的訂書肽合成相關(guān)技術(shù)，曾為國內(nèi)多所高校公司合成近千條訂書肽。

α-螺旋是蛋白二級結(jié)構(gòu)*常見的一種，將其用于藥物研發(fā)受到了大量關(guān)注。多肽的不穩(wěn)定構(gòu)象導(dǎo)致易被酶水解以及生物利用率低，這些都可以通過α-螺旋結(jié)構(gòu)構(gòu)象的穩(wěn)定化來解決。Hydrocarbon stapled peptides是在特定位點引入化學(xué)交聯(lián)的一種全烴化裝訂，將迷你蛋白鎖定在他們的生物活性的α-螺旋構(gòu)象中。多肽裝訂的理念是用于克服兩大類治療試劑的靶向細(xì)胞內(nèi)蛋白相互作用的局限性：小分子和蛋白生物制劑。作為一類新興的下一代藥物，Stapled Peptide應(yīng)該具備易于合成和容易進(jìn)入細(xì)胞的能力，以及能夠多靶標(biāo)識別的生物活性。

   有兩種構(gòu)象化策略用于引入和穩(wěn)定α-螺旋結(jié)構(gòu)，即α雙取代（甲基化螺旋骨架）和巨環(huán)橋形成（約束構(gòu)象）。在多肽內(nèi)裝訂從而使兩個合適的空隔合并：α-甲基化，α-alkenylglycine殘基，有確定的立體化學(xué)構(gòu)象和烯烴鏈長度，然后在樹脂上進(jìn)行釕介導(dǎo)的烯烴復(fù)分解反應(yīng)，從樹脂上切割并去保護(hù)后便可產(chǎn)生Stapled Peptide。下圖顯示了在多肽中產(chǎn)生穩(wěn)定α-螺旋的三種不同的全烴裝訂類型。α-甲基化和α-alkenylglycine用于每一種Stapled Peptide的生成，通常命名為XY，X表示在烯基側(cè)鏈中a-carbon的空間化學(xué)位置（Cahn-Ingold-Prelog命名），Y表示長度。在固相多肽合成的過程中，α-甲基化，α-alkenylglycine交聯(lián)氨基酸并入了合適的的位置。i， iStapled Peptide在i和i+3位置反別需要一單位的R5和S5. i，i+4 Stapled Peptide需要兩單位的S5并入在對應(yīng)的i和i+4位置。i，i+7 Stapled Peptide在i位置需要一單位R8，i+7位置需要一單位S5。用Grubbs I催化樹脂連接多肽發(fā)生烯烴復(fù)分解反應(yīng)，在2個非天然氨基酸之間發(fā)生交聯(lián)，從而產(chǎn)生固定α-螺旋構(gòu)象的Stapled Peptide。

Click Chemistry合成Stapled Peptide

   “Click”反應(yīng)（銅催化1,3-偶極環(huán)加成反應(yīng)）高效且反應(yīng)條件溫和，加之必需非天然氨基酸容易

   合成使得single triazole-stapled peptides容易合成。例如，L-Nle(εN3) 和 D-Pra (D- Propargylalanine)在i和i+4位置交聯(lián)可用于產(chǎn)生single triazole-stapled peptides。

Stapled Peptide修飾

   典型的Stapled Peptide修飾有兩類：熒光標(biāo)記和親和標(biāo)簽。兩種*常用的添加到Stapled Peptide N末端的基團(tuán)是熒光素和生物素，熒光素用于研究細(xì)胞吸收和生物物理性質(zhì)檢測，生物素用于生理性質(zhì)和體外靶向作用評估。這些修飾通常需要一個彈性的分子間隔以分隔Stapled Peptide核心和修飾基團(tuán)。

   N-乙酰化

   交聯(lián)點（β-丙氨酸，迷你-PEG 等）

   熒光標(biāo)記（FITC，5-FAM等）

   裝訂在藥物設(shè)計中的重要性：

   引入烴裝訂可以產(chǎn)生高水平的α-螺旋，能增加5-5000倍的靶親和力，保護(hù)其不被酶降解，提高細(xì)胞滲透能力通過細(xì)胞內(nèi)吞囊泡進(jìn)入，延長體內(nèi)半衰期，在培養(yǎng)細(xì)胞內(nèi)特異性阻止蛋白蛋白相互作用。

   更好的靶親和力

   難被講解，增加血清半衰期

   通過內(nèi)吞囊泡運(yùn)輸進(jìn)入細(xì)胞

   阻止蛋白蛋白相互作用

   無免疫原性

   可行的藥物動力和體內(nèi)穩(wěn)定性

   有研究證明Stapled Peptide可靶向多種癌癥、糖尿病、HIV、動脈粥樣硬化等疾病相關(guān)蛋白，這些蛋白包括像：BCL-2, BCL-XL, BAX, MCL-1, 葡萄糖激酶, hDM2, hDMX, NOTCH/CSL, HIV-1 衣殼, HIV-1 gp41, ABCA1 和雌激素受體。

   設(shè)計和合成Stapled Peptide推薦文獻(xiàn)：

   Design and Structure of Stapled Peptides Binding to Estrogen Receptors

   J. Am. Chem. Soc., 2011, 133 (25), pp 9696–9699

   這篇文章描述了設(shè)計一系列結(jié)合到雌激素受體的共激活肽結(jié)合位點的新Stapled Peptide。這個設(shè)計使用了許多生物物理技術(shù)，包括受體-Stapled Peptide化合物晶體結(jié)構(gòu)分析，這篇文章詳細(xì)地描述了分子間反應(yīng)，揭示了all-hydrocarbon staples調(diào)節(jié)分子識別。這些研究發(fā)現(xiàn)揭示了一般怎樣設(shè)計Stapled Peptide

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