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生物**水平	II
生物	智人
源器官	乳腺
生長(zhǎng)特性	追隨者
形態(tài)學(xué)	鵝卵石或主軸形
推薦播種密度	將全部?jī)?nèi)容物解凍成根據(jù)傳播說(shuō)明書中指定的適當(dāng)?shù)腡25燒瓶。
標(biāo)記	在DCFI-1中生長(zhǎng)時(shí)，K5，K14，波形蛋白，E-鈣粘蛋白，p63，K8，K18，K19，CD29，CD49f a-SMA，CD10，Thy-1
應(yīng)用	僅供研究使用
永生化方法	用攜帶hTERT基因的重組慢病毒進(jìn)行連續(xù)傳代和轉(zhuǎn)導(dǎo)
描述	永生化的人類乳腺祖細(xì)胞--HTERT（K5 + / K19 +）是共表達(dá)正常乳腺和干細(xì)胞標(biāo)記物的祖細(xì)胞的克隆細(xì)胞群。它具有自我更新和分化成管腔和/或肌上皮細(xì)胞譜系的能力。通過(guò)在不同優(yōu)化培養(yǎng)基中的繁殖，細(xì)胞能夠產(chǎn)生具有不同形態(tài)和特征的新種群的細(xì)胞，如粘蛋白-1陽(yáng)性細(xì)胞，波形蛋白陰性細(xì)胞，或表達(dá)基底，管腔和其他干細(xì)胞標(biāo)記物。醛脫氫酶1A3酶的表達(dá)明顯較高，通常用于分離正常和腫瘤乳腺干細(xì)胞。K5 + / K19 +細(xì)胞具有Wnt，Notch和hedeghog基因調(diào)控途徑。
程序概述
圖片
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傳播	使用PriCoat?T25燒瓶（G299）或應(yīng)用細(xì)胞細(xì)胞外基質(zhì)（G422）是細(xì)胞粘附到培養(yǎng)容器所必需的。在以下條件下培養(yǎng)含有ECM的培養(yǎng)容器中的細(xì)胞。為了制備DFCI-1，基礎(chǔ)培養(yǎng)基是可從ABM（TM018和TM004）獲得的Prigrow VIII和Prigrow IV（1：1，vol / vol）培養(yǎng)基。為了制備完成的生長(zhǎng)培養(yǎng)基，*終濃度為0.01M HEPES（Gibco; 15630），1％胎牛血清（TM999），12.5ng / ml（EGF）表皮生長(zhǎng)因子（Z100135） ，6.5ng / ml三碘甲狀腺原氨酸（Sigma; T5516），0.545ng / mlβ-雌二醇（Sigma; E2257），1μg/ ml胰島素（Z101065），1μg/ ml氫化可的松（Sigma; I5500），0.006X乙醇胺; E9508），14.1μg/ ml磷酸乙醇胺（Sigma; P0503），10μg/ ml轉(zhuǎn)鐵蛋白（Sigma; T2252），2mM谷氨酰胺（Gibco; 250微克/毫升亞硒酸鈉（Sigma; S1382），1ng / mg霍亂毒素（Sigma; C8052），35μg/ ml牛垂體提取物（Hammond Cell Tech），1％青霉素/鏈霉素（G255）或10μg/ ml慶大霉素（Gibco; 15750-060）和10μg/ ml抗壞血酸（Sigma; A4034）。調(diào)節(jié)至pH 7.4。氣氛：空氣：93.5％，CO 2：6.5％; 溫度：37.0℃。 優(yōu)化培養(yǎng)基： 用一些肌上皮細(xì)胞標(biāo)記（a-SMA，CD10，Thy-1）表達(dá)基底細(xì)胞，管腔和干細(xì)胞標(biāo)記物，在DFCI-1中培養(yǎng)細(xì)胞。 對(duì)于細(xì)胞在緊密上皮細(xì)胞集落周圍采用紡錘形狀形態(tài)，粘蛋白-1陽(yáng)性細(xì)胞的存在在補(bǔ)充有B27（10ml / 500ml培養(yǎng)基）的乳腺上皮生長(zhǎng)培養(yǎng)基（MEGM; Lonza CC-3151），20ng / ml（EGF）表皮生長(zhǎng)因子（Z100135），20ng / ml FGF2（Z101455），4μg/ ml肝素，和青霉素/鏈霉素（G255）。氣氛：空氣：93.5％，CO 2：6.5％; 溫度：37.0℃。 對(duì)于腔分化和肌上皮分化的缺失以及粘蛋白-1陽(yáng)性和波形蛋白陰性細(xì)胞的出現(xiàn)，在DCFI-2培養(yǎng)基中生長(zhǎng)細(xì)胞，其中堿為α-MEM和Prigrow IV（1：1，體積/體積）介質(zhì)可從ABM（TM004）獲得。補(bǔ)充，0.01M HEPES（Gibco; 15630），12.5ng / ml（EGF）表皮生長(zhǎng)因子（Z100135），6.5ng / ml三碘甲狀腺原氨酸（Sigma; T5516），0.545ng / mlβ-雌二醇（Sigma; E2257） 1μg/ ml胰島素（Z101065），1μg/ ml氫化可的松（Sigma; I5500），0.006X乙醇胺（Sigma; E9508），14.1μg/ ml磷酸乙醇胺（Sigma; P0503），10μg/ ml轉(zhuǎn)鐵蛋白（Sigma; T2252） ，2mM谷氨酰胺（Gibco; 25030-081），2.6ng / ml亞硒酸鈉（Sigma; S1382），1ng / mg霍亂毒素（Sigma; C8052），0。05％牛血清白蛋白（BSA），1％青霉素/鏈霉素（G255）或10μg/ ml慶大霉素（Gibco; 15750-060）和10μg/ ml抗壞血酸（Sigma; A4034）。調(diào)節(jié)至pH 7.4。氣氛：空氣：93.5％，CO 2：6.5％; 溫度：37.0℃。
保存	1.冷凍培養(yǎng)基：具有20％FBS和10％DMSO的完全生長(zhǎng)培養(yǎng)基。2.儲(chǔ)存溫度：液氮?dú)庀唷?/span>
質(zhì)量控制	1）Western印跡以評(píng)估細(xì)胞譜系相關(guān)和干細(xì)胞標(biāo)記物; 2）譜系標(biāo)記的免疫熒光染色分析; 3）用于基因調(diào)控途徑的基因表達(dá)譜
放棄	1.該產(chǎn)品的CoA（根據(jù)要求提供）僅通過(guò)RT-PCR驗(yàn)證細(xì)胞型特異性基因表達(dá)。CoA中提供的所有測(cè)試參數(shù)均使用abm的標(biāo)準(zhǔn)化培養(yǎng)系統(tǒng)和程序進(jìn)行。所述值可能在*終用戶的文化條件下不同。請(qǐng)通過(guò)參考已發(fā)表的論文或訂購(gòu)RNA（0.5μg，Cat。＃C207，$ 450.00）或細(xì)胞裂解液（100μg，Cat。＃C206，$ 600.00）來(lái)驗(yàn)證該產(chǎn)品是否適合您的研究，以進(jìn)行初步實(shí)驗(yàn)，或者使用我們的基因表達(dá)測(cè)定服務(wù)（Cat＃C138）。所有銷售都是*終的。 2.我們強(qiáng)烈推薦活細(xì)胞出貨以方便細(xì)胞轉(zhuǎn)移，訂購(gòu)時(shí)可以要求提供此選項(xiàng)。請(qǐng)注意，*終用戶需要考慮到*終目的地的溫度變化及其地理位置來(lái)評(píng)估活細(xì)胞裝運(yùn)的可行性。此外，我們徹底測(cè)試我們的細(xì)胞系凍融恢復(fù)。如果收集冷凍細(xì)胞，并且在實(shí)驗(yàn)室中沒有在**的指定條件下（使用推薦的培養(yǎng)容器，培養(yǎng)基，附加補(bǔ)充劑和大氣條件）回收細(xì)胞，則可能需要花費(fèi)（加運(yùn)費(fèi)）進(jìn)行活細(xì)胞更換。 所有abm的細(xì)胞生物學(xué)產(chǎn)品僅供研究使用，不適用于治療/診斷應(yīng)用。abm對(duì)于在治療/診斷應(yīng)用中使用其細(xì)胞生物學(xué)產(chǎn)品引起的任何影響不承擔(dān)任何責(zé)任。有關(guān)詳細(xì)信息，請(qǐng)聯(lián)系技術(shù)服務(wù)代表。 4.本網(wǎng)站對(duì)信息的準(zhǔn)確性不作任何保證或聲明。文獻(xiàn)引用僅供參考。abm不保證此類信息已被證明是準(zhǔn)確的。
公司簡(jiǎn)介	合肥星肽生物科技有限公司作為專業(yè)的ABM中國(guó)代理商，專業(yè)經(jīng)營(yíng)原裝進(jìn)口胎牛血清，細(xì)胞因子，ELISA試劑盒，細(xì)胞，抗體，生物試劑，耗材，培養(yǎng)基，一抗，二抗等.ABM安徽代理的產(chǎn)品涉及分子生物學(xué)，細(xì)胞生物學(xué)，細(xì)菌學(xué)，遺傳學(xué)，免疫學(xué)，生物化學(xué)，蛋白質(zhì)學(xué)，細(xì)胞治療，臨床應(yīng)用等領(lǐng)域。合肥星肽生物科技有限公司始終致力于為客戶提供可靠的研究材料以及方便快捷的服務(wù)，對(duì)購(gòu)買項(xiàng)目的前期資料提供，中期合同保證，后期貨物跟蹤到*終售后的確保項(xiàng)目準(zhǔn)確到位，都有相關(guān)專業(yè)人士進(jìn)行維護(hù)，確保您在合肥合肥星肽生物科技有限公司公司獲得*上等服務(wù)！
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