細(xì)胞簡介：

小鼠II型肺泡上皮細(xì)胞分離自肺組織，肺泡由單層上皮細(xì)胞構(gòu)成的半球狀囊泡。肺中的支氣管經(jīng)多次反要分枝成無數(shù)細(xì)

支氣管， 它們的末端膨大成囊，囊的四周有很多突出的小囊泡，即為肺泡。小肺泡細(xì)胞， 又稱I型肺泡細(xì)胞，厚約0.1微

米，基底部是基底膜， 無增殖能力。大肺泡細(xì)胞，又稱II型肺泡細(xì)胞， 分泌表面活性物質(zhì)（ 二棕櫚酰卵磷脂）， 以降低肺

泡表面張力。II型肺泡細(xì)胞位于I 型肺泡細(xì)胞之間，數(shù)量較I 型肺泡細(xì)胞多， 但覆蓋面積比I 型肺泡細(xì)胞小。細(xì)胞立方形

或圓形頂端突入肺泡腔。細(xì)胞核圓形，胞質(zhì)者色淺、呈泡沫狀。電鏡下，細(xì)胞游離而有少益微絨毛，胞質(zhì)內(nèi)富含線粒體和

溶酶體，有較發(fā)達(dá)的粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基復(fù)合體。核上方有較多的分泌顆粒， 電子密度高、大小不等，亙徑約0. 1-1.0μm

顆粒內(nèi)含有平行排列的板層狀結(jié)構(gòu)， 稱為嗜餓性板層小體。小體內(nèi)的主要成分為碳脂，以二棕櫚酰卵磷脂為主，此外還有

糖胺多糖及蛋白質(zhì)等。顆粒內(nèi)物質(zhì)釋放出來后， 在肺泡表面形成—層粘液層， 稱為表面活性物質(zhì)( surfactant) 。表面活

性物質(zhì)有降低肺泡表面張力、穩(wěn)定肺泡大小的作用。呼氣時(shí)肺泡縮小，表面活性物質(zhì)密度增加，表面張力降低， 防止肺泡

過度塌陷；吸氣時(shí)肺泡擴(kuò)張， 表面活性物質(zhì)密度減小， 肺泡回縮力加大， 可防止肺泡過度膨脹。表面活性物質(zhì)的缺乏或變

性均可引起肺不張， 過度通氣可造成表面活性物質(zhì)缺乏，吸入毒氣可直接破壞~表面活性物質(zhì)。II型肺泡細(xì)胞有分裂、增殖

并分化為I 型肺泡細(xì)胞的潛能，故具有修復(fù)受損傷上皮的作用。

1) 收到非紅系有核細(xì)胞后，請檢查是否漏液 ，如果漏液，請拍照片發(fā)給我們。
2) 請先在顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞生長 狀態(tài)，去掉封口膜并將T25瓶置于37℃培養(yǎng)約2-3h。
3) 棄去T25瓶中的培養(yǎng)基，添加 6ml本公司附帶的完全培養(yǎng)基。
4) 如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%請及 時(shí)進(jìn)行細(xì)胞傳代，傳代培養(yǎng)用6ml本公司附帶的完全培養(yǎng)基。
5) 接到細(xì)胞次日，請檢查細(xì)胞是 否污染，若發(fā)現(xiàn)污染或疑似污染，請及時(shí)與我們?nèi)〉寐?lián)系。

小鼠Ⅱ型肺泡上皮細(xì)胞培養(yǎng)操作

1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補(bǔ) 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或?qū)?細(xì)胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。**天換液并 檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。 
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細(xì)胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分 變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。 
3. 按 6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液，補(bǔ)加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細(xì)胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為類；
1. 細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶，細(xì)胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。
2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細(xì)胞，根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加 入血 清和 DMSO，輕輕混勻，DMSO 終濃度為 10%，細(xì)胞密度不低于1x106/ml，每支凍存管凍存 1ml 細(xì)胞懸液，注意凍 存管做好標(biāo)識。
3. 將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80 度冰箱，2 個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

小鼠Ⅱ型肺泡上皮細(xì)胞培養(yǎng)注意事項(xiàng)

1. 收到非紅系有核細(xì)胞后首先觀察細(xì)胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn) 象發(fā)生請及 時(shí)和我們聯(lián)系。
2. 仔細(xì)閱讀細(xì)胞說明書，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如細(xì)胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所 需細(xì)胞因子 等，確保細(xì)胞培養(yǎng)條件一致。若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問 題，責(zé)任由客戶自行承擔(dān)。
3. 用 75%酒精擦拭細(xì)胞瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問題貼壁細(xì)胞會有少量 從瓶 壁脫落，將細(xì)胞置于培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng) 4~6 小時(shí),再取出觀察。此時(shí)多數(shù)細(xì)胞均 會貼壁，若細(xì)胞仍不能貼壁請用臺盼藍(lán) 染色測定細(xì)胞活力，如果證實(shí)細(xì)胞活力正常， 請將細(xì)胞離心后用新鮮培養(yǎng)基再次貼壁培養(yǎng)；如果染色結(jié)果顯示細(xì)胞無活 力，請拍下 照片及時(shí)和我們聯(lián)系，信息確認(rèn)后我們?yōu)槟倜赓M(fèi)寄送一次。
4. 靜置細(xì)胞貼壁后，請將細(xì)胞瓶內(nèi)的培養(yǎng)基倒出，留 6~8mL 維持細(xì)胞正常培養(yǎng)，待ATCC CRL-1711(Sf9)細(xì) 胞匯 合度  80%左右時(shí)正常傳代。
5. 請客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細(xì)胞培養(yǎng)。培養(yǎng)瓶內(nèi)多余的培養(yǎng)基可收集備用，細(xì)胞 傳代時(shí)可以 一定比例和客戶自備的培養(yǎng)基混合，使細(xì)胞逐漸適應(yīng)培養(yǎng)條件。
6. 建議客戶收到細(xì)胞后前 3 天各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和 技術(shù) 部 溝通交流。由于運(yùn)輸?shù)脑颍瑐€(gè)別敏感細(xì)胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時(shí)和我們聯(lián) 系，告知細(xì)胞的具體情況，以便我們 的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問題解決。
7.該細(xì)胞僅供科研使用。

  合肥星肽生物科技有限公司作為美國ATCC專業(yè)代理商，專業(yè)經(jīng)營ATCC菌種、ATCC原代細(xì)胞、培養(yǎng)基、抗體、生物試劑、耗材等，合肥星肽生物科技有限公司與ATCC共同努力致力于為客戶提供可靠的研究材料以及方便快捷的服務(wù)，對購買項(xiàng)目的前期資料提供,中期合同保證,后期貨物跟蹤到*終售后的確保項(xiàng)目準(zhǔn)確到位，都有相關(guān)專業(yè)人士進(jìn)行維護(hù),確保您在合肥星肽生物科技有限公司獲得*上等服務(wù)！

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