細胞簡介:
大鼠肝枯否細胞分離自肝臟組織,肝臟是身體內以代謝功能為主的—個器官,并在身體里面起著去氧化、儲存肝糖、分
泌性蛋白質的合成等作用;肝臟也制造消化系統中之膽汁。肝臟是機體內臟里*大的器官,位于機體中的腹部位置,在
右側橫膈膜之下,位于膽囊之前端且于右邊腎臟的前方,胃的上方。肝臟是機體消化系統中*大的消化腺,為—紅棕色
的V字形器官。肝臟是尿素合成的主要器官,又是新陳代謝的重要器官。肝臟在機體位置和形態結構:肝臟位于右上腹,
隱藏在右側隔下和肋骨深面,大部分肝為肋弓所覆蓋,僅在腹上區、右肋弓間露出并宜接接觸腹前壁,肝上面則與膈及
腹前壁相接。枯否氏細胞(Kupffe細胞)是肝臟的肝血竇內—些固定于竇壁的巨噬細胞,它能吞噬和清除大部分從腸道
來的抗原微粒,并能吞噬和清除肝血竇中的細菌、異物和衰老的紅細胞,并把血紅蛋白分解成膽紅素。此外,肝巨噬細
胞也有處理抗原,誘導T細胞增殖,參與免疫調節的作用。枯否氏細胞和—般巨噬細胞不同,枯否氏細胞不具有增加抗原
免疫原性的能力,相反有消除或減弱抗原性的作用。枯否氏細胞能吞噬來自血液循環的抗原抗體復合物和其他有害物
質,以消除這些物質對機體的損害??莘窦毎δ苷系K可導致腸源性內毒素血癥。電鏡下有很多皺褶和微絨毛。
大鼠肝枯否細胞接受后處理
1) 收到非紅系有核細胞后,請檢查是否漏液 ,如果漏液,請拍照片發給我們。
2) 請先在顯微鏡下確認細胞生長 狀態,去掉封口膜并將T25瓶置于37℃培養約2-3h。
3) 棄去T25瓶中的培養基,添加 6ml本公司附帶的完全培養基。
4) 如果細胞密度達80%-90%請及 時進行細胞傳代,傳代培養用6ml本公司附帶的完全培養基。
5) 接到細胞次日,請檢查細胞是 否污染,若發現污染或疑似污染,請及時與我們取得聯系。
大鼠肝枯否細胞培養操作
1)復蘇細胞:將含有細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,加 入 4mL 培養基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘,棄去上清液,補 加 1-2mL 培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培 養過夜(或將 細胞懸液加入 10cm 皿中,加入約 8ml 培養基,培養過夜)。**天換液并 檢查細胞密度。
2)細胞傳代:如果細胞密度達 80%-90%,即可進行傳代培養。
1. 棄去培養上清,用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養瓶中,置于 37℃培 養箱中消化 1-2 分鐘,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分 變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養 瓶后加少量培養基終止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶補加培養基,輕輕打勻后吸出,在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘,棄去上清液,補加 1-2mL 培養液后吹勻。
4. 將細胞懸液按 1:2 比例分到新的含 8ml 培養基的新皿中或者瓶中。
3)細胞凍存:待細胞生長狀態良好時,可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為類;
1. 細胞凍存時,棄去培養基后,PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶,細胞變圓 脫 落后,加入 1ml 含血清的培養基終止消化,可使用血球計數板計數。
2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細胞,根據細胞數量加 入血 清和 DMSO,輕輕混勻,DMSO 終濃度為 10%,細胞密度不低于1x106/ml,每支凍存管凍存 1ml 細胞懸液,注意凍 存管做好標識。
3. 將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80 度冰箱,2 個小時以后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
大鼠肝枯否細胞培養注意事項
1. 收到非紅系有核細胞后首先觀察細胞瓶是否完好,培養液是否有漏液、渾濁等現象,若有上述現 象發生請及 時和我們聯系。
2. 仔細閱讀細胞說明書,了解細胞相關信息,如細胞形態、所用培養基、血清比例、所 需細胞因子 等,確保細胞培養條件一致。若由于培養條件不一致而導致細胞出現問 題,責任由客戶自行承擔。
3. 用 75%酒精擦拭細胞瓶表面,顯微鏡下觀察細胞狀態。因運輸問題貼壁細胞會有少量 從瓶 壁脫落,將細胞置于培養箱內靜置培養 4~6 小時,再取出觀察。此時多數細胞均 會貼壁,若細胞仍不能貼壁請用臺盼藍 染色測定細胞活力,如果證實細胞活力正常, 請將細胞離心后用新鮮培養基再次貼壁培養;如果染色結果顯示細胞無活 力,請拍下 照片及時和我們聯系,信息確認后我們為您再免費寄送一次。
4. 靜置細胞貼壁后,請將細胞瓶內的培養基倒出,留 6~8mL 維持細胞正常培養,待ATCC CRL-1711(Sf9)細 胞匯 合度 80%左右時正常傳代。
5. 請客戶用相同條件的培養基用于細胞培養。培養瓶內多余的培養基可收集備用,細胞 傳代時可以 一定比例和客戶自備的培養基混合,使細胞逐漸適應培養條件。
6. 建議客戶收到細胞后前 3 天各拍幾張細胞照片,記錄細胞狀態,便于和 技術 部 溝通交流。由于運輸的原因,個別敏感細胞會出現不穩定的情況,請及時和我們聯 系,告知細胞的具體情況,以便我們 的技術人員跟蹤回訪直至問題解決。
7.該細胞僅供科研使用。
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