細胞簡介：
大鼠冠狀動脈平滑肌細胞分離自冠狀動脈組織，冠狀動脈是供給心臟血液的動脈，起于主動脈根部，分左右兩支，行
于心臟表面。采用Sch l esinger等的分類原則，將冠狀動脈的分布分為三型：右優勢型、均衡型、左優勢型。左右冠狀動
脈是升主動脈的第—對分支。左冠狀動脈為---短干 發自左主動脈竇經肺動脈起始部和左心耳之間，沿冠狀溝向左前
方行后，立即分為前室間支和旋支。前室間支沿前室間溝下行，旋支繞過心尖切跡至心的脯面與右冠狀動脈的后室間支
相吻合。它是構成冠狀動脈壁的主要細胞成分，細胞膜上分布菩多種離子通道，如電壓依賴性Na+通追、多種Ca2+通道
和K+通道；它們參與了靜息電位的維持與細胞膜電位的要極化、超極化，調節血管平滑肌的收縮及舒張功能，此外動脈
粥樣硬化的發展也涉及冠狀動脈平滑肌細胞增殖、炎癥及凋亡等。因此， 原代分離培養的冠狀動脈平滑肌細胞，對研究
生理和病理狀態下離子通追及血管張力變化機制具有非常重要的作用。冠狀動脈平滑肌細胞原代分離培養3天后，可見細
胞貼壁伸展，細胞形態大小不—，呈梭形、不規則形、三角形或扇形，核卵圓形、居中， 2周后細胞匯合，多數細胞伸展
呈長梭形，胞漿豐富，有分枝狀突起，細胞平行排列成單層或部分區域多層重疊生長，高低起伏；細胞密度低時，常交
織成網狀，密度高時，則排列為旋渦狀或棚欄狀。傳代后細胞生長較快， 4-6天即可匯合，并保持上述形態學特征和生長
特點。
大鼠冠狀動脈平滑肌細胞接受后處理
1) 收到非紅系有核細胞后，請檢查是否漏液 ，如果漏液，請拍照片發給我們。
2) 請先在顯微鏡下確認細胞生長 狀態，去掉封口膜并將T25瓶置于37℃培養約2-3h。
3) 棄去T25瓶中的培養基，添加 6ml本公司附帶的完全培養基。
4) 如果細胞密度達80%-90%請及 時進行細胞傳代，傳代培養用6ml本公司附帶的完全培養基。
5) 接到細胞次日，請檢查細胞是 否污染，若發現污染或疑似污染，請及時與我們取得聯系。
大鼠冠狀動脈平滑肌細胞培養操作
1）復蘇細胞：將含有細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補 加 1-2mL 培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培 養過夜（或將 細胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養基，培養過夜）。**天換液并 檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達 80%-90%，即可進行傳代培養。
1. 棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養瓶中，置于 37℃培 養箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分 變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養 瓶后加少量培養基終止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶補加培養基，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液，補加 1-2mL 培養液后吹勻。
4. 將細胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養基的新皿中或者瓶中。
3）細胞凍存：待細胞生長狀態良好時，可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為類；
1. 細胞凍存時，棄去培養基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶，細胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養基終止消化，可使用血球計數板計數。
2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細胞，根據細胞數量加 入血 清和 DMSO，輕輕混勻，DMSO 終濃度為 10%，細胞密度不低于1x106/ml，每支凍存管凍存 1ml 細胞懸液，注意凍 存管做好標識。
3. 將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80 度冰箱，2 個小時以后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
大鼠冠狀動脈平滑肌細胞培養注意事項
1. 收到非紅系有核細胞后首先觀察細胞瓶是否完好，培養液是否有漏液、渾濁等現象，若有上述現 象發生請及 時和我們聯系。
2. 仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關信息，如細胞形態、所用培養基、血清比例、所 需細胞因子 等，確保細胞培養條件一致。若由于培養條件不一致而導致細胞出現問 題，責任由客戶自行承擔。
3. 用 75%酒精擦拭細胞瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態。因運輸問題貼壁細胞會有少量 從瓶 壁脫落，將細胞置于培養箱內靜置培養 4~6 小時,再取出觀察。此時多數細胞均 會貼壁，若細胞仍不能貼壁請用臺盼藍 染色測定細胞活力，如果證實細胞活力正常， 請將細胞離心后用新鮮培養基再次貼壁培養；如果染色結果顯示細胞無活 力，請拍下 照片及時和我們聯系，信息確認后我們為您再免費寄送一次。
4. 靜置細胞貼壁后，請將細胞瓶內的培養基倒出，留 6~8mL 維持細胞正常培養，待ATCC CRL-1711(Sf9)細 胞匯 合度 80%左右時正常傳代。
5. 請客戶用相同條件的培養基用于細胞培養。培養瓶內多余的培養基可收集備用，細胞 傳代時可以 一定比例和客戶自備的培養基混合，使細胞逐漸適應培養條件。
6. 建議客戶收到細胞后前 3 天各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態，便于和 技術 部 溝通交流。由于運輸的原因，個別敏感細胞會出現不穩定的情況，請及時和我們聯 系，告知細胞的具體情況，以便我們 的技術人員跟蹤回訪直至問題解決。
7.該細胞僅供科研使用。
合肥星肽生物科技有限公司作為美國ATCC專業代理商，專業經營ATCC菌種、ATCC原代細胞、培養基、抗體、生物試劑、耗材等，合肥星肽生物科技有限公司與ATCC共同努力致力于為客戶提供可靠的研究材料以及方便快捷的服務，對購買項目的前期資料提供,中期合同保證,后期貨物跟蹤到*終售后的確保項目準確到位，都有相關專業人士進行維護,確保您在合肥星肽生物科技有限公司獲得*上等服務！
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