1、紫色桿菌（Chromobacterium violaceum) CV026，自身不產生N-酰基-高絲氨酸內酯（AHLs）類信號分子，僅當外源AHLs信號分子出現時，菌株才能夠產生紫色菌素，并檢測出環境中的信號分子C4-HSL～C8-HSL。
2、C.violaceum是一種革蘭氏陰性菌, 其紫色桿菌素的產生受群體感應系統的嚴密調控, 可以作為群體感應抑制活性的篩選模型[1].C.violaceum ATCC12472是一種野生型紫色桿菌, 它可以自主產生信號分子調控紫色桿菌素的產生.而C.violaceum CV026是C.violaceum ATCC31532的mini-Tn5的突變體, 不能自主產生信號分子, 因此不會產生紫色桿菌素，只有當添加外源信號分子時, 才能啟動其群體感應系統并產生紫色桿菌素[2].
3、CV026菌種的復蘇： 將-80℃保存的紫色桿菌CV026接種于LB肉湯，30℃過夜培養。以2%接入量接種于10 m L含有10μg/mL卡那霉素的LB肉湯中，30℃培養24h,用于后續實驗。
4、AHLs標準品：C4-HSL、C6-HSL、C8-HSL、C10-HSL、C12-HSL、C14-HSL、3-oxo-C8-HSL、3-oxo-CiO-HSL、3-oxo-Ci2-HSL、3-oxo-Ci4-HSL 購買自美國Sigma。
5、群體感應 (quorum sensing, QS) 是細菌細胞間交流的一種通訊機制, 具有QS機制的細菌通過感知環境中低分子質量、可擴散的信號分子來調控菌體密度,并在信號分子達到閾值時啟動相關基因表達, 從而調控細菌的生理行為, 以適應環境的變化。
群體感應 (Quorum sensing, QS) 是微生物的一種細胞密度依賴的信號傳感系統.它可以通過其自身分泌的信號分子感知細胞密度的變化, 一旦細胞密度達到閾值時, 會啟動其調控的基因表達調控微生物群體的行為, 如生物發光、生物膜形成、群集運動、色素產生以及毒素產生等. 破壞病原菌群體感應系統可以顯著降低其毒力因子的表達水平, 而不影響其生長繁殖, 理論上不會導致耐藥性的形成.
6、 細菌AHLs產物的檢測實驗方案
取待檢測菌在37度條件下，培養基6ｈ、12ｈ、18ｈ、24ｈ、30ｈ、36ｈ、42ｈ培養菌液，離心（10000轉/min，10min)，取上清，保存備用。
LB中添加瓊脂（瓊脂添加量1％）滅菌后，將活化的報告菌紫桿菌CV026取5ml加入到50ml LB瓊脂中，混合均勻后倒平板。待凝固后，在平板中間打孔，將待檢細菌培養上清液加入孔中。在28度培養24ｈ，觀察顏色變化，測量變色直徑。CV026菌液自身的上清為陰性對照。
7、QS抑制劑檢測實驗:菌株CV026過夜活化兩次后, 按2%接入量接種于含有20μg/m L卡那霉素的新鮮LB肉湯中, 160 r/min振蕩培養16~18 h, 與100 m L含有20μg/ml C6-HSL (信號分子) LB營養瓊脂培養基混合, 倒平板, 待凝固后用牛津杯打孔, 將200μL不同劑量的綠薄荷精油 (0.5、1.0、1.5μL/m L和2.0μL/m L) 加到孔中。將平板置于28℃條件下培養1~2 d, 觀察紫色菌素的產生情況。以體積分數50%甲醇溶液作為陰性對照。
QS抑制劑 (QS inhibitors, QSIs) 是指那些可以阻斷細菌種內或種間信息交流, 對細菌QS現象具有抑制或干擾作用的物質。
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[1]DANIEL M, GILLES G, URS S, et al.Effects of natural and chemically synthesized furanones on quorum sensing in Chromobacterium violaceum[J].BMC microbiology, 2004, 4 (1) :1-10.
[2]MOROHOSHI T, KATO M, FUKAMACHI K, et al.Nacylhomoserine lactone regulates violacein production in Chromobacterium violaceum type strain ATCC 12472[J].Fems microbiology letters, 2008, 279 (1) :124-130.
[3]劉麗. 群體感應AHLs信號分子對魚源殺鮭氣單胞菌致腐及抗脅迫能力的影響[D].浙江工商大學,2018.
[4]梅永超,李婷婷,劉楠,王當豐,赫彬彬,勵建榮.綠薄荷精油對溫和氣單胞菌群體感應現象及其腐敗特性的抑制作用[J].食品科學,2018,39(15):17-23.
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