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人臍靜脈血管內皮細胞概述

人臍靜脈血管內皮細胞概述
消化細胞
  消化液:用pH7.0-7.2的PBS或D-Hank’S液,分別配制0.25%胰酶液和0.02%EDTA-Na2液,用前按1:1混合。在細胞傳代或凍存前先消化細胞。(人臍靜脈血管內皮細胞)具體操作如下:吸凈培養液,每瓶加消化液1ml,搖勻使其布滿培養瓶細胞面。37℃消化2-5分鐘。顯微鏡下看細胞回縮成圓形后,輕輕震動使絕大部細胞脫落后,每瓶加含10%FBS的RPMI-1640液的中和液4-5ml中和胰酶的消化作用,并用吸管輕輕吹打培養面使細胞完全脫落后,吸至15ml無菌離心管內。4℃1500rpm離心10分鐘棄上清,再用中和液洗滌細胞,離心棄上清,加適量RPMI-1640液,混勻后取10ul 細胞(人臍靜脈血管內皮細胞)懸液加10ul臺盼藍混勻后作細胞計數,按需要做步驟四或五。
細胞傳代
  方法同步驟二。
細胞凍存
  調整細胞數2-5×10個/ml,按含細胞的RPMI-1640液ml數,配制等量的凍存液。凍存液中FBS占80%,DMSO占20%。例:含細胞的RPMI-1640液為8ml,應配凍存液8ml,其中FBS為6.4ml,DMSO為1.6ml,混勻。置細胞懸液于冰浴中,逐滴加入凍存液,邊加邊搖動。加完后用吸管吹打混勻。于冰浴中分裝細胞于凍存管中,1.8ml/管,再將凍存管置于凍存盒內置-80℃冰箱,24小時后轉入液氮中保存。

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