miRNA質(zhì)粒載體 

MicroRNA（miRNA）是一類真核生物內(nèi)源性的小分子單鏈RNA，通常長為18~25nt，能夠通過與靶mRNA特異性的堿基配對結(jié)合，引起靶序列降解或抑制其翻譯，從而對基因進(jìn)行轉(zhuǎn)錄后的表達(dá)調(diào)控。

MicroRNA 表達(dá)載體構(gòu)建

MicroRNA（miRNA）是一類真核生物內(nèi)源性的小分子單鏈RNA，通常長為18~25nt，能夠通過與靶mRNA特異性的堿基配對結(jié)合，引起靶序列降解或抑制其翻譯，從而對基因進(jìn)行轉(zhuǎn)錄后的表達(dá)調(diào)控（如右圖所示）。SYNTHBIO MicroRNA載體利用CMV啟動子可以在眾多哺乳動物細(xì)胞中快速、高效、持續(xù)表達(dá)pre-miRNA，經(jīng)過Drosha（RNaseⅢ）作用形成small hairpin pre-miRNAs（約70nt），再過Dicer作用形成成熟的microRNA（約22nt），作用靶mRNA，起到表達(dá)調(diào)控作用。

microRNA過表達(dá)載體

SYNTHBIO提供兩種過表達(dá)的方式：

1. 從天然的基因組序列中表達(dá)pre-miRNA轉(zhuǎn)錄本構(gòu)建pre-microRNA。插入序列不僅包含pre-miRNA莖環(huán)結(jié)構(gòu)，同時構(gòu)建100-200bp長的上下游兩端的側(cè)翼序列。使用使用pol-Ⅱ（如CMV）啟動子，這種構(gòu)建方式保證高水平的表達(dá)pre-microRNA。表達(dá)出來的pre-miRNA的生理活動盡可能接近天然狀態(tài)。

使用這種構(gòu)建方式，客戶只需提供miRNA的具體信息及指定過表達(dá)載體類型（如SYNTHBIOpEX系列 M核過表達(dá)載體?，我們完成序列合成，質(zhì)粒構(gòu)建。

2. 利用SYNTHBIO優(yōu)化過的載體，模擬內(nèi)源miRNA-155的表達(dá)模塊，這種構(gòu)建方法解決了不同miRNA表達(dá)效率差異的問題，同時也有效的避免了有些內(nèi)源miRNA表達(dá)時產(chǎn)生-3p，-5p的問題。miRNA的發(fā)夾序列融合在EGFP報告基因的后面，模擬miRNA在體內(nèi)的成熟過程。

備注：保證插入序列正確，不保證miRNA的過表達(dá)效率，不保證轉(zhuǎn)染效率。所有實驗僅供科研使用。

microRNA抑制子表達(dá)載體

SYNTHBIO提供兩種miRNA抑制子載體構(gòu)建的方式：


1. ;)PAN>利用SYNTHBIO優(yōu)化過的載體，模擬內(nèi)源miRNA-155的表達(dá)模塊，來表達(dá)miRNA inhibitor序列。這種構(gòu)建與SYNTHBIO miRNA過表達(dá)方式2使用同樣的載體系統(tǒng)，方便客戶使用同一套系統(tǒng)完成miRNA的過表達(dá)與抑制。
使用這種構(gòu)建方式，客戶只需提供miRNA的具體信息，我們完成序列合成，質(zhì)粒構(gòu)建。

miRNA sponge的特點(diǎn)：

a. 由于miR Sponges是由質(zhì)粒編碼的，它能夠通過真核表達(dá)載體達(dá)到穩(wěn)定沉默細(xì)胞microRNA的目的；
b. 能夠沉默整個家族的microRNA以達(dá)到對整個家族microRNA功能的研究；
c. 可以利用miR Sponges實現(xiàn)體內(nèi)外loss of function研究；
d. 可以用來檢測luciferase靶基因報告系統(tǒng)分析；
e. 可以自由組合串聯(lián)不同miRNA抑制子序列，達(dá)到沉默多種不同miRNA的目的。
使用這種構(gòu)建方式，客戶需提供miRNA的具體信息、預(yù)構(gòu)建miRNA inhibitor的重復(fù)數(shù)及預(yù)構(gòu)建inhibitor的序列信息，我們完成序列合成，質(zhì)粒構(gòu)建。

SYNTHBIO公司已經(jīng)利用自己的miRNA載體骨架成功構(gòu)建為數(shù)眾多的miRNA的過表達(dá)載體，載體庫中的miRNA expression vectors 1周之內(nèi)即可出貨，價格更優(yōu)。

2. miRNA sponge（海綿）載體構(gòu)建：SYNTHBIO通過構(gòu)建載體，表達(dá)包含多個成熟miRNA結(jié)合位點(diǎn)的RNA序列，通過吸附結(jié)合成熟miRNA，從而抑制miRNA的作用，從而進(jìn)行功能缺失性研究。

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