shRNA慢病毒載體

慢病毒表達載體包含了包裝、轉(zhuǎn)染、穩(wěn)定整合所需要的遺傳信息。慢病毒包裝質(zhì)粒可提供所有的轉(zhuǎn)錄并包裝RNA到重組的假病毒載體所需要的所有輔助蛋白。為產(chǎn)生高滴度的病毒顆粒，需要利用表達載體和包裝質(zhì)粒同時共轉(zhuǎn)染細胞.

慢病毒表達載體包含了包裝、轉(zhuǎn)染、穩(wěn)定整合所需要的遺傳信息。慢病毒包裝質(zhì)粒可提供所有的轉(zhuǎn)錄并包裝RNA到重組的假病毒載體所需要的所有輔助蛋白。為產(chǎn)生高滴度的病毒顆粒，需要利用表達載體和包裝質(zhì)粒同時共轉(zhuǎn)染細胞，在細胞中進行病毒的包裝，包裝好的假病毒顆粒分泌到細胞外的培養(yǎng)基中，離心取得上清液后，可以直接用于宿主細胞的感染，目的基因進入到宿主細胞之后，經(jīng)過反轉(zhuǎn)錄，整合到基因組，從而高水平的表達效應(yīng)分子。

載體的技術(shù)特點

1、大大提高對于一些較難轉(zhuǎn)染的細胞， 如原代細胞、干細胞、不分化的細胞等轉(zhuǎn)導(dǎo)效率

2、快速獲得高水平的表達

3、目的基因整合到宿主細胞基因組的幾率大大增加

4、將免疫反應(yīng)降到*低

5、能夠插入大的片段(~7.5 kb)

6、能夠應(yīng)用于干細胞研究

7、*低的細胞毒性

慢病毒表達系統(tǒng)

本公司使用的慢病毒表達系統(tǒng)，它由三部分組成：慢病毒表達載體、慢病毒包裝質(zhì)粒、可產(chǎn)生假病毒顆粒的細胞系。

慢病毒表達載體包含了包裝、轉(zhuǎn)染、穩(wěn)定整合所需要的遺傳信息。慢病毒包裝質(zhì)粒可提供所有的轉(zhuǎn)錄并包裝RNA到重組的假病毒載體所需要的所有輔助蛋白。為產(chǎn)生高滴度的病毒顆粒，需要利用表達載體和包裝質(zhì)粒同時共轉(zhuǎn)染細胞，在細胞中進行病毒的包裝，包裝好的假病毒顆粒分泌到細胞外的培養(yǎng)基中，離心取得上清液后，可以直接用于宿主細胞的感染，目的基因進入到宿主細胞之后，經(jīng)過反轉(zhuǎn)錄，整合到基因組，從而高水平的表達效應(yīng)分子。

慢病毒介導(dǎo)的 siRNA活體實驗用病毒液服務(wù)流程

對于活體 RNAi實驗?zāi)Ｐ停琒YNTHBIO公司可以為您生產(chǎn)高質(zhì)量的病毒液，服務(wù)流程如下：

根據(jù)目的基因相關(guān)信息（序列，序列號等），利用高效的設(shè)計軟件，設(shè)計 siRNA序列，針對每條目的基因，我們設(shè)計4條siRNA序列，其中1條序列為陰性對照組；

根據(jù)設(shè)計好的 siRNA序列，設(shè)計，合成兩條互補的短片段的DNA；

對合成好的 DNA片段進行稀釋，退火，連接到線形化處理過的載體，轉(zhuǎn)化，涂平板，過夜培養(yǎng)；

通過 PCR的方法篩選陽性菌落，進行測序，分析測序結(jié)果；

對于測序正確的重組質(zhì)粒，提取和純化高質(zhì)量的不含內(nèi)毒素的 siRNA病毒穿梭質(zhì)粒；

利用構(gòu)建好的質(zhì)粒做轉(zhuǎn)染實驗， 48小時后通過實時熒光定量和Western的方法分析目的基因，篩選出一條*有效的siRNA序列；

篩選出的高效重組載體和病毒包裝質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染 293T細胞，進行病毒包裝和生產(chǎn)，收集病毒液；

濃縮、純化病毒液，測定滴度；

提供高質(zhì)量的病毒液給客戶（對于活體實驗，我們建議的病毒基本單位為 1×10^9TU/ml ，對于小鼠尾靜脈給藥建議50~100ul/只）

Lentiviral shRNA的基因沉默效率

Lentiviral shRNA 抑制生長導(dǎo)管形成

Lentiviral shRNA 引起的表型變化

即用型Lentivirus shRNA構(gòu)建包裝服務(wù)

Lentivirus shRNA服務(wù)特點：

1、適用于原代培養(yǎng)細胞，難以轉(zhuǎn)染的各種細胞

2、可用于制備多種穩(wěn)定沉默特定基因的細胞株

3、您通過********** SupersilencingTM Vector方法篩選到有效的的基因沉默靶點，如果您需要構(gòu)建慢病毒載體來滿足實驗需求

Lentivirus shRNA載體

********** Supersilencing Vector 干擾載體

包裝載體：Helper vector-I

Helper vector-II

Helper vector-III

提高包裝效率和對特定細胞的感染力,提高生物**性

品質(zhì)保證

客戶自己提供的序列委托我們制備的病毒顆粒，我們確保制備的病毒顆粒攜帶片段的正確性，確保病毒顆粒的總數(shù)和病毒顆粒的滴度達到合同規(guī)定的要求。

siRNA高效表達慢病毒載體構(gòu)建

1. 通過專業(yè)設(shè)計人員的精心篩選獲得欲篩選的siRNA序列。

2. 設(shè)計siRNA 正義、反義鏈，選擇相應(yīng)loop結(jié)構(gòu)，加上酶切位點的目的序列。

3. 合成相應(yīng)的DNA序列，然后克隆于相應(yīng)的慢病毒表達載體。

4. 將載體轉(zhuǎn)化到宿主菌中進行克隆、篩選，得到質(zhì)粒重組體即siRNA表達載體。

5. siRNA表達載體在真核細胞中可產(chǎn)生siRNA，從而在細胞內(nèi)產(chǎn)生特定基因的沉默效果。此方法是多種siRNA制備方法中唯壹可以進行長期基因沉默研究的方法。

本公司為您提供siRNA高效表達慢病毒載體構(gòu)建服務(wù)。構(gòu)建好的siRNA表達載體，可直接用于轉(zhuǎn)染細胞進行RNA干擾操作。

服務(wù)要求

1. 通過E-mail發(fā)送訂單，告知選定的相應(yīng)的基因信息，待構(gòu)建的靶點信息。靶基因在NCBI數(shù)據(jù)庫中的Gene ID、Accession No.

2. 我們可為您免費設(shè)計siRNA序列.

訂購流程

1. 請用E-mail或者電話聯(lián)系SYNTHBIO公司。E-mail:info@synthbio.cn;Tel:0551-68788198。

2. 根據(jù)客戶提供的基因信息設(shè)計siRNA序列，并由客戶確認。

3. 根據(jù)客戶提供的siRNA序列信息或經(jīng)客戶確認的siRNA序列信息設(shè)計引物。

4. 根據(jù)所選擇的慢病毒載體構(gòu)建相應(yīng)的siRNA表達載體。

5. 在完成相應(yīng)的試驗后，我們將為您提供一套完整的實驗結(jié)果，其中包括：實驗操作說明、電子版的測序結(jié)果及彩圖、構(gòu)建好的siRNA慢病毒表達載體質(zhì)粒及其甘油菌等。

選擇合肥星肽生物科技有限公司的理由

生產(chǎn)實力雄厚

合肥星肽生物科技有限公司擁有近2000平方米獨立研發(fā)中心以及無菌實驗室4條完善的多肽生產(chǎn)線，單月可交貨3000條多肽精品，生產(chǎn)研發(fā)速度快，可快速相應(yīng)您的需求。

技術(shù)設(shè)備先進

合肥星肽生物科技有限公司實驗室配備了waters LC-MA/MS、waters uplc，waters全自動純化儀、島津LCMS、全自動凍干系統(tǒng)、紫外分光光度計等專用精密儀器，為您提供高效專業(yè)的技術(shù)服務(wù)。

客戶服務(wù)完善

合肥星肽生物科技有限公司廣大客戶提供專業(yè)的前沿產(chǎn)品、合理的價格、便捷的物流服務(wù)，幫助客戶縮短科研周期、節(jié)省試驗成本，使客戶的科學(xué)研究具有持續(xù)性。

關(guān)于合肥星肽生物科技有限公司

合肥星肽生物科技有限公司是一家致力于生命科學(xué)和生物技術(shù)領(lǐng)域的高科技企業(yè)，公司地址位于科教名城———合肥市。公司主營多肽合成、多肽定制、多肽純化等多肽制備多肽技術(shù)服務(wù)。在合肥市與中科院的關(guān)懷下，2021年初合肥市高新區(qū)與中科院分別與合肥星肽生物科技有限公司簽訂了戰(zhàn)略投資協(xié)議。 公司位于合肥市高新區(qū)安徽中科資城創(chuàng)業(yè)孵化器A區(qū)，擁有2000平方米獨立研發(fā)中心以及無菌實驗室，四條完善的多肽生產(chǎn)線，配備了Waters LC- MS/MS、Waters UPLC、Waters 全自動純化儀、島津LCMS、全自動凍干系統(tǒng)、紫外分光光度計等專用精密儀器保障合肥星肽生物科技有限公司月產(chǎn)3000條精品多肽的生產(chǎn)能力，這些得以讓我們可以為客戶快速準確的提供各種高質(zhì)量的多肽產(chǎn)品及服務(wù)。 合肥合肥星肽生物科技有限公司始終致力于為您的實驗研究提供高品質(zhì)、穩(wěn)定性良好的產(chǎn)品，“做您身邊的多肽合成專家”一直是每個合肥星肽生物科技有限公司人的目標與方向，勵志作為多肽合成行業(yè)標準的風(fēng)向標。公司擁有100余人的專業(yè)團隊，其中博士研究生、碩士研究生10余人。在此基礎(chǔ)上公司配備了一套包含從售前到售后的專業(yè)團隊，力爭做到每個環(huán)節(jié)都“清晰明了”，對每一個問題都“吹毛求疵”，讓您的實驗變得更加簡單，正是憑借這樣的信仰和扎實的多肽合成技術(shù)優(yōu)勢，合肥星肽生物科技有限公司已經(jīng)成為國內(nèi)外高校與眾多生物醫(yī)藥企業(yè)誠信的合作伙伴和堅強的技術(shù)后盾。 公司秉承“專業(yè)鍛造品質(zhì)，服務(wù)打造市場”的經(jīng)營理念，為國內(nèi)廣大客戶提供專業(yè)的前沿產(chǎn)品、合理的價格、便捷的物流服務(wù)。 公司自成立以來，一直致力于多肽合成、多肽定制、多肽純化等多肽制備多肽技術(shù)服務(wù)的研究。幫助客戶縮短科研周期、節(jié)省試驗成本，使客戶的科學(xué)研究具有持續(xù)性。 實驗室配備一支年輕、專業(yè)、富有創(chuàng)造精神且經(jīng)驗豐富的技術(shù)團隊。 合肥星肽生物科技有限公司目前跟國內(nèi)外企業(yè)有著友好的合作往來。斯坦福大學(xué)，牛津大學(xué)，北京大學(xué)，清華大學(xué)，天津大學(xué)，浙江大學(xué)，中科大，香港理工大學(xué)，以及中科院遺傳所，過程所，化學(xué)所，生物細胞所，微生物所等，北京軍科院**醫(yī)學(xué)研究所，武漢病毒研究所等有穩(wěn)定合作。

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